Tintes fluorescentes utilizados para la oligrafía etiquetada

El ADN, como portador de información genética y la base material de la expresión génica, juega un papel extremadamente importante en el crecimiento, el desarrollo, el envejecimiento, la genética y la mutación del organismo. En la actualidad, existen muchos métodos de análisis para determinar el ADN. Entre ellos, la tecnología de la sonda fluorescente es un medio técnico importante para monitorear el monitoreo de tiempo real a nivel molecular con la ayuda de equipos de detección óptica de alta sensibilidad. de fuertes habilidades ambientales han recibido atención generalizada e investigación en análisis biológico. El fragmento de ADN de marcado fluorescente incluye una sonda de oligonucleótido de cricket fluorescente y una sonda de ADN de fragmento de fragmento de marcado fluorescente. En los últimos años, el uso de tintes fluorescentes ha recibido una gran atención a los marcadores no radiactivos y ha logrado un desarrollo rápido. Se usa ampliamente en la medición de la secuencia de ácido nucleico, las pruebas genéticas y el diagnóstico de la enfermedad.

1. ¿Qué es fluorescente?

Cuando la luz ultravioleta o la luz visible se irradian en algún material, estas sustancias emiten la longitud de onda y la intensidad de la luz diferente, y cuando la luz ultravioleta o la luz visible deja de iluminar, esta luz también desaparece rápidamente. Esta luz se llama fluorescente.

La longitud de onda de fluorescencia es más larga que la longitud de onda de los rayos ultravioleta absorbidos. El proceso de fluorescencia simplemente está hablando. En el proceso de absorción de la luz, la energía del fotón se transfiere a las moléculas materiales, las moléculas se estimulan y las moléculas son inestables en la inspiración. El proceso está acompañado por el lanzamiento de El fotón, que produce fluorescencia. Algunas sustancias que pueden producir fluorescencia pueden usarse en cromosomas biológicos, y lo llamamos colorante fluorescente (pigmento fluorescente) o sonda fluorescente.

Segundo, enfriamiento fluorescente

El enfriamiento fluorescente generalmente se refiere al proceso de reducir la intensidad fluorescente a través de los efectos físicos o químicos entre las moléculas de fluorescencia a través del disolvente o solventes correspondientes. En este proceso, el estado base de las moléculas luminosas se acortará hasta cierto punto.

El enfriamiento fluorescente generalmente tiene dos tipos: enfriamiento dinámico y enfriamiento estático. Estas sustancias que pueden causar enfriamiento fluorescente se llaman agentes de enfriamiento fluorescentes, y el enfriamiento fluorescente hace que el rendimiento cuántico fluorescente de las sustancias de fluorescencia se reduzca considerablemente. El enfriamiento fluorescente también se manifiesta en el tramo de colisiones de Husion moleculares, la desaparición o la metástasis de su propia energía y el enfriamiento de las fuerzas externas.

Tercero, la aplicación del oligonucleótido de cordón fluorescente

La aplicación del oligonucleótido de alineación fluorescente es el principio de la hibridación del ácido nucleico. Al realizar varias formas de hibridación con las moléculas objetivo de ácido nucleico, y luego la tecnología de detección de sonda fluorescente relevante se utiliza para analizar el ADN o ARN objetivo. En el método de prueba de diagnóstico relacionado con la aplicación de oligonucleótidos, la detección de fluorescencia (como QPCR basada en sondas fluorescentes) es un tipo de tecnología extremadamente importante. Por ejemplo, por ejemplo, algunas aplicaciones específicas de secuenciación de ADN Sanger e hibridación in situ (como peces), oligonucleótido requieren una marca única y la sonda para la detección fluorescente en tiempo real (sonda de agente de grupo fluorescente) y la sonda (Beacon Molecular) Para la identificación de genes iguales son marcas duales. Incluso si se usa el agente del grupo base fluorescente, se usa el agente dinámico, puede ocurrir el enfriamiento dinámico a través de FRET (transferencia de energía de resonancia fluorescente) o enfriamiento de colisión. El mecanismo de enfriamiento está relacionado con el tipo de sonda. En términos generales, la sonda se abre para aumentar la distancia entre el grupo fluorescente y el agente de enfriamiento para detener el enfriamiento (baliza molecular), o el grupo o agente de enfriamiento fluorescente será el punto ( Sonda taqman) agrietamiento (más común).

Cuarto grupo fluorescente

1. etiqueta de fluorescencia

Existen muchos métodos para que el oligonucleótido etiquete los colorantes fluorescentes, y la elección del etiquetado es diversa, que está relacionada con el cloruro del anillo de aroma, esto determina el lanzamiento fluorescente del tinte. La fosforamidita de CE de 6 famos, la fosforamidita CE de 6 hexos y la fosforamidita del 6 ce. ser utilizado para marcas efectivas de oligucleótido 5 '.

Los otros dos tipos de monómeros de subfosforicidas que se pueden usar para la fluoresceína oligonucleótido: 6-fluoresceína-CE fosforamidita y fluoresceína-cosforamidita. Ambos monómeros incluyen colorantes fluorescentes de las mismas dias fluorescentes como la fosforamidita de 6-FAM CE CE CEC. Diferente esqueleto vinculado. 6-fluoresceína-CE fosforamidita tiene una estructura de glicol de 1,3, y el OH adicional está protegido por DMTR. De esta manera, no solo puede ser monitoreado mediante el monitoreo de liberación de DMTR incluso, sino que también se puede agregar varias veces en el oligonucleótido, que puede usarse para el teñido cromosómico. Sin embargo, esto generalmente requiere un conector (como el espaciador-18) entre cada adición para evitar que la fluoresceína se enfrente. La fluoresceína-CE fosforamidita proporciona la misma posibilidad que la fosforamidita de 6 fluoresceína-CE, pero en este caso, las articulaciones están conectadas a la fluorescencia a través de enlaces de azufre.